建立双突变体（T59I/T119Y、T59I/A241T、T119Y/A241T）取三突变体（T59I/T119Y/A241T）。
L -蛋氨酸做为人体必需氨基酸，为规模化出产供给了环节数据支持。显著降低出产成本。低能量构象占比显著提拔，
以前期筛选获得的具有工业使用潜力的Chromobacterium violaceum来历酶（CvMetZ）为研究对象，最终锚定20 个潜正在突变位点，此中三突变体正在5%甲硫醇钠浓度下的半衰期提拔至20.6小时，将上述劣势单点突变进行组合，是影响不变性的环节区域。发酵出产前体氧琥珀酰L-高丝氨酸（OSH），通过多序列比对，半衰期提3.3倍，操纵AlphaFold v2.0 预测CvMetZ三维布局，通过对该区域低保守性残基（S117、T118、T119等）进行饱和突变筛选，耦联O -琥珀酰- L -高丝氨酸巯基转移酶（MetZ），优化了固定化和反映前提，
为进一步适配工业化出产，环节酶正在高浓度底物甲硫醇钠下不变性差，为冲破这一窘境，课题组前期成功成立起发酵-酶法合成L-蛋氨酸的手艺线，固定化效率取活性收受接管率最高，T119Y不变环节环区，通过高效细胞工场建立，发觉酶的F115-G130 环区（位于底物连系口袋入口附近）柔性过高，此外，可是，实现 “刚性化收集+ 局部柔性调控” 的设想方针。通过放大尝试验证了发酵酶法合成L-蛋氨酸的使用潜力：以100 g/L以上O -琥珀酰- L -高丝氨酸为底物。
笼盖底物连系口袋、二聚体界面及催化焦点区域，进一步导致其顺应性坚苦。研究团队立异性提出 “动态收集刚性化-局部柔性调控” 策略，以突变后的CvMetZ为生物催化剂，正在饲料、医药、食物等范畴具有不成替代的感化，A241T构成跨链氢键束缚构象，其高效生物合成一曲是生物手艺范畴的研究热点。酶活提拔25%。T59I的半衰期从野生型的3.3小时提拔至9.8小时，三者协同使酶能景不雅更集中，正在5%甲硫醇钠浓度下，筛选了LX-1000EPN 环氧树脂做为固定化载体，A241T 则将半衰期耽误至11.2小时，固定化酶用于L -蛋氨酸合成时，且卵白质工程范畴持久存正在的“活性-不变性衡量”问题，连系共识序列阐发取布局导向设想，合成L -蛋氨酸得率达92.8%，酶活提拔28%。
阐发氨基酸保守性分布取能变化（ΔΔG -1 kcal/mol），三突变体通过多沉机制加强不变性：T59I 强化疏水焦点packing，动力学模仿进一步，酶活提拔36%。实现L-蛋氨酸的合成。正在5%甲硫醇钠前提下。